DisCollection.ru

Авторефераты и темы диссертаций

Поступления 18.09.2012

Материалы

загрузка...

РАЗРАБОТКА И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕТОДОВ НОРМАЛИЗАЦИИ ОБМЕННЫХ ПРОЦЕССОВ ТВЕРДЫХ ТКАНЕЙ ЗУБА В УСЛОВИЯХ РАЗВИТИЯ КАРИОЗНОГО ПРОЦЕССА

Ипполитов Юрий Алексеевич, 18.09.2012

 

Электрометрическую диагностику твердых тканей зуба (Г.Г.Иванова, 1984, И.А. Жорова, 1989) проводили с помощью аппарата «ДентЭст» фирмы ЗАО «ГеософтДент», г. Москва. Всем пациентам применяли витальное окрашивание зубов 2% водным раствором метиленового синего. Оценку флюоресценции твердых тканей зуба проводили с помощью активатора светодиодного «LED актив 05» при длине волны 530 нм, освещенности 100 000 лк, а также длине волны 625 нм при плотности мощности излучения 140 мВт/см2 фирмы ООО «МЕДТОРГ+», г. Воронеж. Функциональное состояние эмали определяли с помощью теста оценки резистентности эмали (ТЭР-теста) по В.Р. Окушко, Л.И. Косаревой (1983).

Вязкость ротовой жидкости определяли по Т.Л. Рединовой, А.Р. Поздееву (1994). Для определения кислотности ротовой жидкости использовали иономер И-500 базовый. Показатель микрокристаллизации ротовой жидкости определяли по Н.В. Курякиной (1993). Определение буферной емкости слюны осуществляли с помощью набора CRT buffer фирмы «Ivoclar vivadent». Активность лизоцима в смешанной слюне определяли по методике О.В. Бухарина (1974). Оценку эффективности пломбирования кариозных полостей проводили на основании пяти критериев состояния пломб по Д.М. Каральнику (1979). Клинико-лабораторные методы исследования позволили сформировать три клинические группы пациентов, определить показания для дальнейших лабораторных исследований, а также обосновать показания для удаления зубов. Лабораторным методам исследования были подвержены удаленные зубы пациентов от 16 до 60 лет по ортодонтическим и пародонтологическим показаниям (см. табл. 1).

С помощью рентгеновского технического компьютерного томографа «ВТ-50» исследованы рентгеновские томограммы 30 удаленных зубов при 20-кратном увеличении плотности облучения 200-250 рентген.

Растровую электронную микроскопию (РЭМ) и рентгеноспектральный микроанализ (РСМА) поверхности эмали и глубоких слоев твердых тканей 120 удаленных зубов оценивали с помощью низковакуумного растрового электронного микроскопа модели «JEOL JSM-6380LV» (Япония). Исследование микрорельефа зуба проводили в режиме вторичной электронной эмиссии при ускоряющем напряжении 10-15 кВ и увеличении от 200 до 5000 крат. Распределение химических элементов в области границы пломбировочного материала и лечебно-профилактических средств с тканями зуба было исследовано методом микрорентгеноспектрального картирования поперечных сколов 63 зубов с помощью системы энергодисперсионного анализа (ЭДА) INCA-250. Планарное распределение химических элементов оценивали по окраске рентгеновского изображения разными цветами, задаваемыми оператором.

Спектры зеркального отражения и нарушенного полного внутреннего отражения (НПВО) снимали на микроскопе HELIOS в комплекте с ИК-Фурье спектрометром Vertex 70 фирмы Bruker (Германия), что позволило снимать спектры пропускания, зеркального отражения и НПВО с малых участков образца. При измерении пропускания и зеркального отражения минимальный размер анализируемого участка имеет диаметр 0.9 мм. При измерении НПВО применяется призма из кремния с размером контактного участка в диаметре 250 мкм.

Таблица 1

Распределение пациентов по группам обследования

Распределение 1020 пациентов по группам

Клинические группы Удаленные зубы для лабораторных исследований 412 пациентов с низкой кариесрезистентностью, сопутствующей патологией хроническим генерализованным пародонтитом средней и тяжелой степенью, профессиональной вредностью

Контрольная группа (I)

Пациенты с высокой

кариесрезистентностью Группа с кариесом эмали (II)

n=67 Группа с кариесом дентина (III)

n=64 интактные зубы

n=183 кариозные зубы

Пациенты с достаточной кариесрезистентностью Пациенты с пониженной кариесрезистентностью

1-я подгруппа

применение ЛПС*, содержащих аминокислоты и гиалуроновую

кислоту

2-я подгруппа

применение ЛПС*, не содержащих аминокислоты и гиалуроновую

кислоту

1-я подгруппа

применение ЛПС*, содержащих аминокислоты и гиалуроновую

кислоту

2-я подгруппа

применение ЛПС*, не содержащих аминокислоты и гиалуроновую

кислоту

Пациентам оказана стоматологическая помощь согласно

медицинским стандартам

Примечание:* ЛПС – лечебно-профилактические средства

Выбор областей для исследования и их фотографирование осуществляли с помощью оптического микроскопа с 20-кратным увеличением, входящим в комплект ИК-микроскопа HELIOS. Диаметр участка мы измерили с помощью объект-микрометра. Режимы съемок для зеркального отражения и НПВО были следующими: количество сканов 64, диапазон – от 4000 до 400 см-1. Обработку спектров проводили с помощью спектрально-программного комплекса OMNIC-7, позволяющего также производить расчет спектров поглощения из спектров отражения на основании соотношения Крамерса-Кронига. Для верификации полученных данных шлифы зубов были исследованы методом ИК-микроспектроскопии с использованием синхротронного излучения на синхротроне SRC Aladdin Университета Мэдисон (штат Висконсин, США). Измерение проводили на канале Ifrared Spectromicroscopy, который обеспечивает работу в диапазоне от 720 до 4000 см-1 с использованием Фурье спектрометра Thermo Fisher Scientific, совмещенного с ИК-микроскопом. Разрешение при получении спектров составляло 2 см-1. В работе были исследованы шлифы 60 зубов пациентов в возрасте от 18 до 45 лет: 20 шлифов – интактные зубы, 20 – с кариесом эмали, 20 – с кариесом дентина.

Морфологические и гистохимические исследования 60 парафиновых срезов до 9 мкм, приготовленных после декальцинации и резки на микротоме по Г.А.Меркулову (1961), Р.П. Самусен (2002), а также 60 шлифов человеческих зубов проводили с помощью обзорной микроскопии окрашенных препаратов: гематоксилином Караци-эозином по Г.А.Меркулову(1961), нейтральные гликопротеины идентифицировали шик-реакцией с периодатным окислением по J.F.A.McManus, R.D.Hotchkiss (1948), суммарный белок выявляли реактивом сулема-бромфеноловый синий, рН 6,9 по D.Maziala, P.A.Brever, M.Alfert (1953), катионный белок (КБ) оценивали с помощью бромфенолового синего, рН 8,4 по М.Г.Шубичу (1973). Контрольные реакции выполнены с использованием трипана и хлористого тионина для деполимеризации белков и блокады карбоксильных групп маркерных аминокислот КБ. Гиалуроновую кислоту выявляли реакцией с ферригидроксидзолем, рН 1,8 по G.Muller (1965), гистидин – окрашиванием бромфеноловым синим, рН 8,58 по Э.Г.Быкову (1989) и сульфатированные полисахариды – окрашиванием толуидиновым синим, рН 4,4 по H. Belanger, H.G. Harznett (1960).

Количественные исследования выполнены на установке «Микротелс - 4», где осуществляли оцифровку микротелевизионного изображения в пределах выбранных областей и расчет величин экстинкций по точкам.

Для решения задачи о репрезентативной выборке использовался метод аккумулированных средних. Изучено 120 зубов человека в возрасте от 16 до 60 лет, удаленных по ортодонтическим показаниям, а также при хроническом генерализованном пародонтите тяжелой степени.

В 10 полях зрения проводили количественную оценку окраски микропрепарата шлифа зуба на основе впервые примененной программы Image J. Осуществлялась оценка только маркированных изображений, эквивалентных максимальной хромности органических веществ, представленная в PIXELS.

В соответствии с целью и задачами исследования результаты исследования были сгруппированы таким образом, чтобы можно было сопоставить различные качественные и количественные показатели. Статистический анализ материалов, полученных в результате выполнения диссертации, проводился с использованием математического пакета программ «STATISTICA 6.Х», «BIOSTAT», которые являются интегрированной средой статистического анализа и обработки данных.

Кроме того, использовался факторный анализ для выявления латентных переменных и классификаций групп переменных. Для прогноза ряда показателей использовался метод регрессионного анализа в варианте множественной линейной регрессии.

Для визуализации структуры исходных данных и результатов их анализа использованы графические возможности системы STATISTICA for Windows и модуль построения диаграмм системы Microsoft Office.

Результаты исследования и их обсуждение