DisCollection.ru

Авторефераты и темы диссертаций

Поступления 13.02.2012

Материалы

загрузка...

Особенности постинфекционного и поствакцинального гуморального иммунитета к коклюшу

Зайцев Евгений Михайлович, 13.02.2012

 

Разработка и характеристика ИФА тест-систем для выявления антител к антигенам В. рertussis

Для оценки гуморального постинфекционного и поствакцинального иммунитета к коклюшу разработаны методы выявления антител к антигенам B. рertussis с учетом антигенного состава вакцинных и выделенных от больных коклюшем штаммов возбудителя.

В качестве штамма-продуцента комплекса антигенов коклюшного микроба выбран вакцинный штамм №475 B. рertussis, имеющий все три основных агглютиногена, отличающийся стабильным уровнем продукции антигенов и обладающий также стабильными ростовыми характеристиками. Нами разработана технология выделения из среды культивирования этого штамма комплекса основных протективных антигенов коклюшного микроба, включающего коклюшный токсин, филаментозный гемагглютинин, агглютиногены 1, 2 , 3 и ЛПС. Обезвреженный формалином комплекс антигенов является основой разработанной в НИИВС им. И.И. Мечникова бесклеточной коклюшной вакцины (Н.С. Захарова и соавт., 2008). Наличие в составе комплексного антигена основных протективных антигенов коклюшного микроба позволило сделать предположение о перспективности использования этого препарата в качестве лиганда в ИФА для выявления противококлюшных антител. По данным ИФА антигенный состав разных серий комплекса антигенов был стабильным (табл. 1).

Специфичность тест - систем определяли при анализе сывороток здоровых детей в возрасте 3 - 5 лет, привитых АКДС – вакциной. Чувствительность тест-систем определяли при анализе сывороток больных коклюшем детей с положительными результатами бактериологического анализа (табл. 2). В качестве положительных результатов (диагностических титров) антител принимали титры антител в 2 и более раз превышающие средние титры сывороток здоровых привитых детей.

$, привитых АКДС - вакциной детей, однако средние титры антител у больных коклюшем были достоверно выше.

Таблица 1

Содержание отдельных антигенных компонентов в комплексных препаратах

B. pertussis

Содержание антигенов (% от общего белка препарата)

коклюшный токсин филаментозный гемагглютинин агглютиногены

1 2 3

№ 36 11,7 31,7 12,7 3,3 3,7

№ 37 11,9 29,4 14,3 3,2 3,9

№ 38 13,6 30,5 13,6 3,4 4,2

№ 42 12,4 31,3 10,6 3,8 3,8

№ 43 12,1 27,4 12,0 3,4 4,4

№ 44 12,0 31,5 12,2 2,9 4,1

№ 45 10,1 29,0 11,0 2,8 4,0

М ± м 12,0 ± 1,0 30,1 ± 1,6 12,3 ±1,3 3,3 ± 0,3 4,0 ± 0,24

КВ* 8,3% 5,3% 10,5% 9,1% 6%

Примечание: * - коэффициент вариации.

Таблица 2

Чувствительность и специфичность ИФА тест-системы на основе комплекса антигенов B. pertussis.

Изотип антител Привитые здоровые дети

(n=240) Диагностический титр Больные коклюшем

(n = 23)

диапазон титров антител титр антител (М±м) специфичность** (%±m)

диапазон титров антител титр антител М±м чувствительность*** (%±m)

IgМ 1:10-1:200 32±12 97,9±

0,9 ?100 1:20-1:800 210 ±70* 61±10,2

IgA 1:10-400 34±8 96,7±

0,96 ?100 1:40-1600 320 ±100* 78±8,6

IgG 1:50-1:1600 640±150 92,1±

1,7 ?1600 1:100-1:12800 2200±700* 87±7,0

IgG1 1:10-1:320 75±25 95±

1,4 ?200 1:20-1:640 250± 80* 83±7,8

IgG2 1:10-1:160 40±10 96,7±

1,2 ?100 1:20-1:320 160 ±50* 74±9,1

IgG3 1:10-1:80 15±5 99,2±

0,6 ?40 1:20-1:320 120 ±40* 70±9,6