DisCollection.ru

Авторефераты и темы диссертаций

Поступления 03.03.2010

Материалы

загрузка...

Состояние прооксидантно-антиоксидантного баланса в процессе развития гнойной раны и возможности коррекции его нарушений (экспериментально-клиническое исследование)

Федосов Сергей Ростиславович, 03.03.2010

 

Новизна результатов исследования

Впервые разработан способ лабораторной диагностики окислительного стресса, включающий определение уровня компонентов прооксидантно-антиоксидантных систем организма, который обладает точностью, достаточной для достоверности определения состояния антиоксидантной системы (АОС) на системном уровне у больных с гнойными

Предложен аппаратно-программный комплекс лабораторной диагностики окислительного стресса, основанный на обработке с помощью ЭВМ биофизических показателей состояния АОС на системном и местном уровнях у больных с гнойными ранами.

Впервые предложена программа регистрации сигналов хемилюминотестера ЛТ-1, позволяющая определять максимум и площадь быстрой вспышки хемилюминесценции.

Модифицированы и внедрены в хирургическую практику способ получения биологического материала из раны для анализа состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса на местном уровне и метод контроля динамики изменения площади раны, позволяющий производить планиметрию с высокой скоростью и достаточной точностью.

Впервые исследована динамика состояния АОС у больных с гнойными ранами параллельно на системном и на местном уровнях в процессе эволюции гнойной раны, проведен корреляционный анализ изменений отдельных показателей в экссудате раны и в периферической крови в зависимости от площади раны.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

Определение прооксидантно-антиоксидантного статуса на локальном уровне дает возможность достоверно дифференцировать характер течения и фазу раневого процесса, а также корректировать проводимое лечение.

Имеется прямая взаимосвязь между неферментными показателями, характеризующими окислительный стресс у хирургических больных, и площадью гнойной раны.

У всех пациентов с сопутствующим сахарным диабетом отмечается неадекватная реакция АОС на дополнительное ее раздражение в динамике развития гнойного процесса, особенно остро манифестирующая у пациентов с острым гнойным процессом.

У пациентов с острым гнойным процессом на фоне сахарного диабета на локальном уровне имеется тенденция к сохранению прооксидатной нагрузки, в то время как у пациентов с хроническим характером течения гнойного процесса особенностью является меньший уровень активации и торпидность динамики оксидативных процессов.

Теоретическая значимость исследования

Установлен характер динамики прооксидантно-антиоксидантного баланса на местном уровне (в раневом экссудате) и на уровне организма (в периферической крови) в процессе развития гнойной раны.

Доказано наличие взаимосвязи изменений показателей прооксидантно-антиоксидантной системы на местном и системном уровнях.

Продемонстрированы различия в изменении прооксидантно-антиоксидантного баланса в условиях неосложненного раневого процесса и в условиях раневого процесса, отягощенного сахарным диабетом.

Практическая значимость исследования. Предложенные методы исследования позволяют оценить характер течения раневого процесса, определить момент перехода раны из одной фазы раневого процесса в другую и оценить индивидуальную потребность в средствах коррекции прооксидантно-антиоксидантного баланса. Разработаны методические рекомендации для проведения исследований, направленных на определение влияния лекарственных средств, применяемых для местного лечения гнойных ран, на прооксидантно-антиоксидантный баланс.

Сведения о практическом использовании результатов исследования. На основании полученных фактов предложены практические рекомендации, используемые в отделении гнойной хирургии краевой клинической больницы № 1 и в отделении хирургии госпиталя МСЧ ГУВД Краснодарского края. Отдельные положения диссертации включены в лекции для общих хирургов и хирургов гнойной специализации на курсах повышения квалификации, а также используются в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической биохимии и кафедре общей хирургии Кубанского государственного медицинского университета.

Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались: на IV Всероссийской конференции общих хирургов с международным участием «Раны и раневая инфекция» (14–15 мая 2007, Ярославль); на XIV Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (1–5 июня 2006, Украина, Крым, Ялта – Гурзуф); на V Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (21–24 апреля 2007, Москва); на XI Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (22–29 апреля 2006, Тенерифе, Канарские острова, Испания). По результатам исследования опубликовано 14 печатных работ, включая 2 патента на изобретения, 1 патент на полезную модель и 1 свидетельство на регистрацию программы для ЭВМ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, шести глав, заключения, выводов, списка литературы и трех приложений. Список литературы включает 108 отечественных и 64 зарубежных источника. Диссертация изложена на 204 страницах, иллюстрирована 52 рисунками (в том числе 7 фотографиями), 12 таблицами, представлено 3 клинических

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу клинических исследований положены результаты наблюдения и лечения 62 больных с гнойными ранами. С целью проведения аналитического и статистического анализа больные были разделены на три основные и две контрольные группы, отличающиеся по нозологии (табл. 1). Пациенты были сопоставимы по возрасту и полу между группами А и группой К1, группой В и группой К2 (p > 0,05).

Таблица SEQ "Табл." \*Arabic 1

Распределение пациентов по группам

Группа Нозология Количество

А1 Флегмона стопы на фоне синдрома

диабетической стопы 20

А2 Гнойная рана стопы на фоне синдрома

диабетической стопы 19

B Флегмона шеи 23

K1 Пациенты, страдающие тяжелым

сахарным диабетом 22

K2 Лица, не страдающие соматическими заболеваниями на момент исследования 20

Всего 104

При поступлении в клинику пациентам выполнялась адекватная хирургическая обработка гнойного очага по традиционной методике [Б.М. Костюченок и соавт., 1986]. В дальнейшем осуществлялись ежедневные перевязки с санацией раны водным раствором антисептика (хлоргексидина биглюконат). Использовались повязки с мазью «Левомеколь» на протяжении всего исследования. Индивидуально для каждого пациента фиксировался момент перехода раны из гнойно-некротической в фазу грануляций (классификация фаз раневого процесса Б.М. Даценко, 1995). Средние сроки момента смены фаз в различных группах составили: в группе А1 – 12±0,4 (1,5) суток, в группе А2 – 10±0,4 (1,7) суток, в группе В – 7±0,2 (1,1) суток.

Площадь раневой поверхности (рис. 1) измерялась на следующие сутки после проведения хирургической обработки гнойного очага с использованием авторского метода [Ю.П. Савченко, С.Р. Федосов, А.М. Плаксин, 2007] и составила в группе А1 56,7 ±1,4 (5.9) см2, в группе А2 – 67,5±1,8 (7,6) см2, в группе В – 77,3±1,6 (7,6) см2.

Рис. 1. Пример фотографии гнойной раны, подготовленной для контроля изменения ее площади в динамике раневого процесса (справа приведен условный эталон площади 25 см2)

Для определения показателей прооксидантно-антиоксидантного баланса на системном уровне забиралась кровь непосредственно из вены пациента с использованием стандартного инструментария и гепаринизировалась в соотношении 1:10, после чего охлаждалась до 8–10° С. Для определения показателей прооксидантно-антиоксидантного баланса на местном уровне отделяемое раны забиралось по методике [А.Р. Ромм и соавт., 1986] в авторской модификации [М.И. Быков и соавт., 2007]. Кровь и экссудат раны забирались на 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 14-е сутки от момента хирургической обработки гнойного очага.

Экспериментальная часть работы была направлена на оценку влияния гидрофильных мазей с антиоксидантными свойствами на состояние прооксидантно-антиоксидантного баланса в раневом отделяемом и клинические показатели течения раневого процесса. Опыты выполнены на двенадцати беспородных кроликах-самцах весом 2,5–3 кг. Кролики были разделены на три группы по четыре животных в каждой: в контрольной группе лечение осуществлялось физиологическим раствором хлорида натрия, в группе № 1 – мазью «Левомеколь», в группе № 2 – гидрофильной мазью на основе водного экстракта Fructus Sophorae japonicae. Раневой процесс моделировался гибридным методом, включающим метод моделирования резаной раны [H.P. Ehrlich и соавт., 1968] и метод моделирования абсцесса [Л.А. Мамедов и соавт., 1988]. Сформированная гнойная рана подвергалась лечению путем ежедневных перевязок. Экссудат раны забирался на 1, 3, 5, 7 и 10-е сутки.

Состояние АОС организма оценивали по активности каталазы (КАТ) и супероксиддисмутазы (СОД) эритроцитов, по уровню восстановленных тиоловых групп эритроцитов и амперометрическому определению антиокислительной активности плазмы крови. Активность КАТ исследовали в гемолизате эритроцитов и раневом отделяемом по методу [R. Beers и соавт., 1952] в авторской модификации [И.И. Павлюченко и соавт., 2006], основанному на оценке скорости убыли субстрата фермента (перекиси водорода). Активность СОД определяли в гемолизате эритроцитов и раневом отделяемом по методике [В.А. Костюк и соавт., 1990] в авторской модификации [И.И. Павлюченко и соавт., 2006], которая основана на способности СОД ингибировать индуцированную реакцию аутоокисления кверцетина. Количество тиоловых групп в гемолизате эритроцитов определяли модифицированным методом с использованием реактива Эллмана [В.Н. Орехович, 1977]. Определение АОА плазмы крови и экссудата раны проводилось модифицированным амперометрическим способом [А.Я. Яшин и соавт., 2003] на анализаторе «Яуза-01-ААА». Способ основан на измерении электрического тока, возникающего при окислении биологического образца на поверхности рабочего электрода при определенном потенциале.

Состояние прооксидантной системы оценивали в плазме крови по исходному количеству продуктов окислительной модификации биомолекул, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБЧ), а в эритроцитах определяли как базальный их уровень, так и состояние после предварительной индукции [И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили, 1977]. Также в плазме крови и в экссудате раны оценивали интенсивность быстрой вспышки хемилюминесценции (БВХЛ) с помощью люминотестера ЛТ-01 в составе системы для диагностики окислительного стресса [И.И. Павлюченко, А.А. Басов, С.Р. Федосов, 2006], включающей аналогово-цифровой преобразователь и ЭВМ с авторской «Программой регистрации сигналов хемилюминотестера ЛТ-01», позволяющей регистрировать амплитуду и площадь хемилюминесценции.